Semana #1 (19 febrero al 23 febrero 2018)
Esta primera semana se basó principalmente en conocer lo que es CDI y cómo funciona. De igual manera me explicaron cuáles son las normas que se tienen que llevar a cabo en CDI Laboratories, Inc.. Me enseñaron los distintos laboratorios y cómo se trabaja en cada uno de ellos. Mi trabajo específicamente se basa en los “Downstream Process”, el cual se compone de los procesos de control de calidad, purificaciones y concentraciones hasta ser enviado al cliente. Al ser un laboratorio molecular es requisito usar la vestimenta “Gowning” cada vez que se entra al laboratorio para evitar contaminación. El primer paso es caminar sobre un “alfombra con pega” la cual reduce el particulado en los zapatos, luego ponerse los “booties” pasando la línea de demarcación. Esta línea divide entre el área sucia y el área limpia. El tercer paso es ponerse la redecilla y la mascarilla. En el cuarto se pone la bata que es desechable y se cambia cada 2 días. Y finalmente ponerse los guantes, los cuales se cambian varias veces al día junto con los “booties”. Me explicaron sobre las pruebas de control de calidad como la Identificación del Isotipo y la Detección de Mycoplasma. La prueba de Identificación de Isotipo es la prueba para determinar el “light chain” y la sub-clase de los anticuerpos, la cual a su vez confirma que los anticuerpos son monoclonales, y la prueba de Detección de Mycoplasma es para verificar que el anticuerpo no esté contaminado con Mycoplasma, ya que puede causar daños a las células como mutaciones. Para la limpieza de cualquier equipo se utiliza el químico Alconox, y se utiliza un cepillo específico dependiendo del equipo para evitar la contaminación. También me explicaron cómo se limpia el “hood” diariamente ya que todos los días antes de comenzar a trabajar se tiene que limpiar para evitar contaminación. El primer paso es añadir HDQ (desinfectante fuerte), luego se remueve con agua deionizada y se añade etanol. Después se añade el “LookOut” (contra Mycoplasma) y por último se cierra el “hood” y se enciende la luz ultravioleta. De igual manera, siempre que se tiene que colocar algún equipo en el “hood”, hay que añadir alcohol 70%, tanto al equipo como en las manos, es requisito. En adición, me explicaron cómo se trabaja en el autoclave. Para esterilizar las botellas previamente lavadas, se le colocan el tape de autoclave y se colocan en el autoclave dejando espacio entre ellas para que el vapor pueda fluir por todas sus partes. También me explicaron cómo se lleva a cabo los procesos de los sobrenadantes (liquido superior luego de centrifugar) para colectarlos y ser purificados. Para todo esto hay que mantener y llevar a cabo un registro de todo el proceso y tiene que estar rotulado. Cada línea celular tiene un clon ID y su “tag” para su identificación. Con el sistema de inventario se registra el producto con un “bardcode” que te indica la posición en el laboratorio.
Semana #2 (26 febrero al 2 marzo 2018)
Para esta semana me explicaron cómo se realiza la limpieza de las incubadoras, ya que este proceso se tiene que llevar a cabo cada mes. Para este proceso primero se desmonta todas las partes de las incubadoras, incluyendo las bandejas, filtros, mangas y abanico, se añade HDQ (desinfectante fuerte), etanol. Estas poseen una bandeja en la parte inferior donde se añade agua deionizada y “Clear Bath” (evita crecimiento de hongos y bacterias). Luego de 24 horas se vuelven a colocar los cultivos que estaban en ella originalmente, ya que este tiempo sirve para que la incubadora vuelva a sus parámetros normales. También me explicaron y tuve la experiencia de concentrar los anticuerpos. Este proceso se lleva a cabo luego de la purificación y utilizando concentradores. Estos poseen una membrana, que no permite el paso de los anticuerpos. Cuando la purificación termina, los anticuerpos se encuentran diluidos en un volumen alto de buffer acídico. Por medio de estos concentradores se descarta ese buffer que puede afectar el pH de los anticuerpos. Se utiliza un “wash buffer” que si contiene el pH adecuado (más neutral) para los anticuerpos. Antes de comenzar a concentrar los anticuerpos se tiene que hidratar la membrana para evitar que se rompa y que no concentren los anticuerpos. Los anticuerpos se colocan en los concentradores y se colocan en la centrifuga. Dependiendo de la concentración es que se toma el tiempo que toma este proceso ya que los que tienen mayor concentración anticuerpos tardan más en bajar, que los que contienen menos.
Semana #3 (5 marzo al 9 marzo 2018)
Para esta semana no se realizaron fusiones (proceso en el que extraen los linfos, luego de la inmunización) ya que se empezó la mudanza por lo que algunas estaciones comenzaron el “Shut down”. Tuve que preparar varios medios ya que hay que seguir los procesos de retroalimentación de los cultivos. También tuve que autoclavear botellas de cristal ya que se prepararían medios de reserva para culminar los cultivos durante el proceso de la mudanza. En adición realice pruebas de Detección de Mycoplasma y las pruebas de Identificación de Isotipo. Mientras que para las pruebas de Mycoplasma se realizan PCR (amplificar el DNA) y electroforesis (separación de moléculas por carga eléctrica y tamaño). Me explicaron cómo preparar las geles de agarosa y tuve la oportunidad de correrlas. Por otra parte, hice una lista de inventario de los materiales que se tienen en laboratorio ya que se empezaron a empacar los equipos que no se iban a utilizar. En adición, me explicaron como realizar la lista de envío al cliente a la hora de enviar los productos.
Semana #4 (12 marzo al 16 marzo 2018)
Para esta semana terminé de colectar los últimos cultivos, los centrifugué y filtré para dejarlos listo para la purificación y concentración, que se realizarán en el edificio nuevo. También continúe con el inventario y empacado todos los equipos y materiales para moverlos al edificio nuevo.
Semana #5 (19 marzo al 23 marzo 2018)
Esta semana se terminó de realizar la mudanza incluyendo los equipos pesados. Me explicaron cómo se lleva cabo el proceso de preparar el cuarto limpio ya que por toda la mudanza todo estaba prácticamente contaminado. Y se realizó una inauguración informal en el nuevo edificio.
Semana #6 (26 marzo al 28 marzo 2018)
Para esta semana se continuó con el acomodo de los equipos y con la limpieza aséptica que se requiere antes de realizar cualquier proceso biológico que se pueda contaminar. Continuamos con la limpieza de los cuartos limpios, “hoods” e incubadoras, todos los días para ir reduciendo poco a poco la contaminación.
Semana #7 (2 abril al 6 abril 2018)
Esta semana realicé un inventario de sobrenadantes y purificados. También realicé las pruebas de Detección de Mycoplasma (QC). En adición, se prepararon otras muestras para realizar las pruebas de Identificación de Isotipo, la cual confirma que el anticuerpo es monoclonal. Finalmente se colectaron “multi-layers” para su purificación. Este se utiliza para expandir los cultivos ya que en su interior contiene varias capas lo que permite mayor área superficial para el crecimiento celular.
Semana #8 (9 abril al 13 abril 2018)
Esta semana preparé medios ya que se hubo que expandir varias líneas celulares. Tuve que preparar varios T25 (envase de 25cm3) y T175 (envase de 175cm3). Una vez llega un cultivo se coloca en un T25 que es pequeño para que empiece a crecer y si hay contaminación no permitir que crezca más. Los T175 es de mayor tamaño, aquí se expanden los cultivos una vez están libre de contaminación y se encuentra saludable, por lo que tendrá un mejor crecimiento. Me explicaron y tuve que hacer “feed-in” donde se añade medio fresco al cultivo para mantener un crecimiento saludable. También tuve que realizar las pruebas de Detección de Mycoplasma y preparar la gel para la electroforesis. Además, tuve que hacer las pruebas de Identificación de Isotipo. Preparé TAE (buffer) que se utiliza para preparar la gel y electroforesis, y PBS (buffer) que se utiliza en las purificaciones y en las concentraciones. Finalmente tuve que concentrar varios anticuerpos.
Semana #9 (16 abril al 20 abril 2018)
Esta semana tuve que preparar medios y buffers como de costumbre. Por lo que tuve que preparar T175 y “multi-layers” para expandir los cultivos. Tuve que colectar varios cultivos y darle “feed-in”. Finalmente llegaron unos cultivos de India a los cuales tuve que preparar su alícuota y preparar los T25 para comenzar su expansión.
Semana #10 (23 abril al 27 abril 2018)
Esta semana tuve que preparar medios, para preparar los T25, T175 y dar feed-in a los cultivos celulares como de costumbre. También, tuve que preparar los “master stock supernatant” (“shipment” que se envía al cliente) y “aliquots” (muestra del “shipment” que se envió al cliente). Preparé las muestras de Detección de Mycoplasma para el PCR y electroforesis. Finalmente colecté varios cultivos celulares para purificación y concentré otros purificados.
Semana #11 (30 abril al 4 mayo 2018)
Esta semana tuve que preparar medios como de costumbre. Me explicaron cómo se realizan los “split”. Esto consiste en disminuir la densidad celular del cultivo lo que permite un mejor crecimiento de las células ya que tienen más espacio y medio fresco. A la hora de congelar los cultivos primero se realiza el conteo celular (densidad celular) y la viabilidad de estas para estar seguro de que no se afectarán de manera significativa las células. También tuve que preparar TAE (buffer) para preparar dos geles y correr las electroforesis.
Semana #12 (7 mayo al 11 mayo 2018)
Esta semana preparé medios para expandir T25, T175 y “feed-in” a los cultivos celulares. Tuve que realizar varios “split” ya que se están corriendo bastantes líneas celulares. Y tuve que preparar el “master stock supernatant” (“shipment”) y “aliquots”para enviárselo al cliente.
Semana #13 (14 mayo al 18 mayo 2018)
Esta semana prepare medios como de costumbre para los cultivos. Tuve que continuar realizando “Split” a las líneas celulares. Prepare las muestras para la Detección de Mycoplasma. Finalmente, preparé el “shipment” para ser enviado al cliente.